Cabecera lazomsalas2019 11 08 CBMSO CSIC UAM

Wednesday, 20th November 2019

FACSAria Fusion

Casa comercial: BD Biosciences

Equipos: 1

Ubicación: Lab 111

Características Técnicas:

    • Cuatro líneas de láser: azul (488nm) y rojo (640nm) y amarillo-verde (561 nm) y violeta (405)
    • Sistema de análisis totalmente digital
    • Velocidad de separación de hasta 25.000 partículas por segundo
    • 8 parámetros analizables simultáneamente (16 parámetros de fluorescencia independientes + FSC y SSC):
      • 2 detectores para el láser 488 nm
        • 530/30-nm FITC
        • 695/40-nm PerCP-Cy5.5 or PI, o 675/20-nm PerCP
      • 5 detectores para el láser 561 nm
        • 582/15-nm PE, DsRed
        • 610/20-nm PE-Texas Red®, mCherry, PI
        • 670/14-nm PE-Cy™5
        • 710/50-nm PE-Cy5.5
        • 780/60-nm PE-Cy7
      • 3 detector para el láser 633nm
        • 670/30-nm APC, Alexa Fluor® 647
        • 730/45 Alexa700
        • 780/60-nm APC-Cy7 o APC-H7
      • 6 detectores para el láser 405 nm
        • 450/50 DAPI
        • 525/40 AmCyan
        • 610/20 BV605
        • 660/60 BV650
        • 710/50 BV711
        • 786/60 BV786
    • Configuración de boquillas y modos de sorting variables (posibilidad de realizar separaciones de partículas de tamaños variables: bacterias, células eucarióticas, con diferentes grados de pureza)
    • Sistema Automatic Cell Deposition Unit (ACDU) con Index Sort. Esto es, un sistema integrado de deposición de una o más células en diferentes soportes desde (placas multipocillo de hasta 384 pocillos, portaobjetos, etc.). En el caso de la deposición de célula única el Index Sort permite identificar en el FCS que célula ha sido depositada en cad pocillo
    • Posibilidad de realizar sortings asépticos
    • Software de adquisición: DiVA 8

Consideraciones para una separación celular

Control de riesgos biológicos

Configuración óptica

rpFACSCanto II

Casa comercial: Becton Dickinson

Equipos: 1

Ubicación: Lab 255-1

Reservar

RECORDAR QUE NO SE PUEDE RESERVAR ESTE EQUIPO MÁS DE 2,5 HORAS POR USUARIO Y DÍA EN LA FRANJA HORARIA DE 11h A 18h

Características Técnicas:

  • Tres líneas de láser: azul (488nm), rojo (633nm) y violeta (405nm)
  • 8 detectores de fluorescencias independientes:
    • 4 detectores para el láser 488nm (azul):
      • 530/30
      • 585/42
      • 670LP
      • 780/60
    • 2 detectores para el láser 633nm (rojo):
      • 660/20
      • 780/60
    • 2 detectores para el láser 405 nm (violeta):
      • 450/50 nm
      • 575 nm

Software: FACSDiva 8.0.1 en el ordenador de adquisición

Manual de uso
FACS Canto II Reference Manual
Citometría multiparamétrica: elección de fluorocromos (BD Biosciences)
BD FACSCanto II Flow Cytometer Quick Reference Guide
Configuración óptica

Casa comercial: Apple

Equipos: 1

Ubicación: Lab 111

Reservar

Ordenador: Mac Mini

Procesador: Intel Core i5 1,4 GHz

Sistema operativo: Mac OS X Yosemite

Disco duro: 1TB

Memoria RAM: 8 GB LPDDR3

Aplicaciones destacadas:

  • FlowJo 7.6.5, 10.0.7 y 10.0.8
  • Microsoft Office
  • Navegadores: Safari y Forefox
  • Adobe Acrobat

Las funciones principales del Servicio de Citometría son:

  • Ofrecer la posibilidad de utilizar técnicas basadas en la citometría de flujo a grupos de investigación del CBMSO que no están familiarizados con esta técnica
  • Asesorar a los usuarios sobre las prestaciones de la técnica de citometría de flujo analítica y su mejor aprovechamiento
  • Desarrollar y optimizar nuevas aplicaciones incorporando nuevos reactivos
  • Realizar aislamientos celulares por cell sorting

A continuación se describen detalladamente las actividades que el Servicio de Citometría de Flujo del CBMSO lleva a cabo:

Asesoramiento y formación a los usuarios del Servicio

  1. Diseño de protocolos para la preparación de las muestras:
    • marcaje de membrana
    • marcaje intracelular
    • marcaje mixto membrana/intracelular
    • ciclo celular/apoptosis
    • exclusión de células muertas por tinción con IP
    • cuantificación de la eficiencia de transfección (ej: expresión de GFP)
  2. Utilización de los softwares de los citómetros (Cell Quest y FlowJo). Creación de planillas para la adquisición de muestras:
    • diseño de histogramas
    • sorting electrónico
    • creación y almacenamiento de ficheros lmd
  3. Ajuste de las condiciones de adquisición específicas: potencia y compensación entre fotomultiplicadores (InstrumentSettings):
    • tamaño y fluorescencia basal de poblaciones
    • compensación entre fluorescencias
    • utilización de la línea de láser 633nm ("segundo láser")
  4. Análisis y presentación de resultados. Utilización de software específicos: Cell Quest, FlowJo, ModFit y WinMDI.
  5. Bibliografía especializada.

Aislamiento celular por cell sorting

  1. Diseño previo de protocolos para la preparación de las muestras:
    • Marcaje: elección de fluorocromos y configuración de filtros para su detección
    • Concentración celular
    • Tampón
    • Filtrado de muestra
  2. Optimización individualizada de las condiciones del sorting:
    • Modalidad de sorting: rendimiento versus velocidad
    • Tamaño de partículas: tipo de boquilla
    • Alineamiento de láser/láseres
    • Ajuste de condiciones específicas para el sorting: presión de sheath, frecuencia de inducción de formación de gotas, carga de placas deflectoras, ajuste del "drop delay"
    • Esterilización del equipo
    • Separación
    • Reanálisis: evaluación de la pureza tras la separación

Mantenimiento de los equipos

  1. Establecimiento de los protocolos y normas para la utilización de los equipos: procedimientos a seguir para su encendido, lavado y apagado
  2. Mantenimiento periódico de los citómetros: calibración
  3. Gestión de las reparaciones en caso de avería
  4. Pedido de reactivos y componentes necesarios para el funcionamiento de los equipos

Desarrollo de nuevas aplicaciones

  1. Desarrollo de nuevas aplicaciones de citometría de flujo analítica:
    • Análisis multiparamétricos complejos: combinaciones de fluorocromos compatibles (líneas de láser y filtros necesarios para su detección)
    • Genes reporteros: variantes de GFP
    • Amplificación de señal
    • Medida de la proliferación celular: CFDA, BrdU
    • Ciclo celular: ciclinas, DNA
    • Activación celular
    • Transducción de señales
    • Secreción de citoquinas mediante ensayo multiplex
    • FRET
    • Ciclo celular en células de drosófila
  2. Desarrollo de nuevas aplicaciones de separación celular por cell sorting. Optimización y puesta a punto de las distintas opciones del equipo de separación celular por cell sorting:
    • Turbosort Plus: para realizar separaciones celulares en condiciones de alta presión/velocidad
    • Macrosort Plus: para la separación de partículas de gran tamaño
    • CloneCyt Plus con Index Sort: sistema integrado de deposición de células en diferentes recipientes (placas multipocillo, portaobjetos, etc)

Tareas administrativas

  1. Contabilidad y facturación del servicio
  2. Presupuestos y peticiones de infraestructuras. Canalización de sugerencias
  3. Contacto con los representantes y el servicio técnico de las casas proveedoras

Desarrollo y mantenimiento de la página Web del servicio de Citometría de Flujo

NOTE! This site uses cookies and similar technologies.

If you not change browser settings, you agree to it. Learn more

I understand

COOKIES POLICY

What are cookies?

A cookie is a file that is downloaded to your computer when you access certain web pages. Cookies allow a web page, among other things, to store and retrieve information about the browsing habits of a user or their equipment and, depending on the information they contain and the way they use their equipment, they can be used to recognize the user.

Types of cookies

Classification of cookies is made according to a series of categories. However, it is necessary to take into account that the same cookie can be included in more than one category.

  1. Cookies according to the entity that manages them

    Depending on the entity that manages the computer or domain from which the cookies are sent and treat the data obtained, we can distinguish:

    • Own cookies: those that are sent to the user's terminal equipment from a computer or domain managed by the editor itself and from which the service requested by the user is provided.
    • Third party cookies: those that are sent to the user's terminal equipment from a computer or domain that is not managed by the publisher, but by another entity that processes the data obtained through the cookies. When cookies are installed from a computer or domain managed by the publisher itself, but the information collected through them is managed by a third party, they cannot be considered as own cookies.

  2. Cookies according to the period of time they remain activated

    Depending on the length of time that they remain activated in the terminal equipment, we can distinguish:

    • Session cookies: type of cookies designed to collect and store data while the user accesses a web page. They are usually used to store information that only is kept to provide the service requested by the user on a single occasion (e.g. a list of products purchased).
    • Persistent cookies: type of cookies in which the data is still stored in the terminal and can be accessed and processed during a period defined by the person responsible for the cookie, which can range from a few minutes to several years.

  3. Cookies according to their purpose

    Depending on the purpose for which the data obtained through cookies are processed, we can distinguish between:

    • Technical cookies: those that allow the user to navigate through a web page, platform or application and the use of different options or services that exist in it, such as controlling traffic and data communication, identifying the session, access to restricted access parts, remember the elements that make up an order, perform the purchase process of an order, make a registration or participation in an event, use security elements during navigation, store content for the broadcast videos or sound or share content through social networks.
    • Personalization cookies: those that allow the user to access the service with some predefined general characteristics based on a series of criteria in the user's terminal, such as the language, the type of browser through which the user accesses the service, the regional configuration from where you access the service, etc.
    • Analytical cookies: those that allow the person responsible for them to monitor and analyse the behaviour of the users of the websites to which they are linked. The information collected through this type of cookies is used in the measurement of the activity of the websites, applications or platforms, and for the elaboration of navigation profiles of the users of said sites, applications and platforms, in order to introduce improvements in the analysis of the data of use made by the users of the service.

Cookies used on our website

The CBMSO website uses Google Analytics. Google Analytics is a simple and easy to use tool that helps website owners to measure how users interact with the content of the site. You can consult more information about the cookies used by Google Analitycs in this link.

Acceptance of the Cookies Policy

The CBMSO assumes that you accept the use of cookies if you continue browsing, considering that it is a conscious and positive action from which the user's consent is inferred. In this regard, you are previously informed that such behaviour will be interpreted that you accept the installation and use of cookies.

Knowing this information, it is possible to carry out the following actions:

How to modify the configuration of cookies

Using your browser you can restrict, block or delete cookies from any web page. In each browser the process is different, here we show you links on this particular of the most used browsers: