Saturday, 16th December 2017
    MICROSCOPÍA ÓPTICA Y CONFOCAL
 

Coordinador Científico:
Fco. Javier Díez-Guerra
Responsable Técnico:
Ángeles Muñoz

 

Microscopía Óptica y Confocal

 

SMOC

 

Comunidad de Madrid

 

ÚLTIMAS NOTICIAS

  • 07-12-2017: LSM510 Vertical reparado. Se ha cambiado el escáner X y el láser de Argón (línea 488).
  • 17-11-2017: Disponible de nuevo eescáner resonante del confocal Nikon A1R.
  • 16-11-2017: Apertura   confocal LSM800 a partir del lunes 20. Para realizar las reservas y organizar las sesiones de formación y asistencia, dirigirse al SMOC (lab 310).
  • 09-02-2017 Láser Maitai del Multifotón fuera de servicio. El equipo se puede utilizar como confocal.
 

ENLACES - REACTIVOS Y FLUORÓFOROS - MEDIOS DE MONTAJE

 

 

ENLACES

Documento sobre - Documento sobre Medios de montaje de "Wright Cell Imaging Facility".

Staudt, et al. (2007). 2,2′-Thiodiethanol: A new water soluble mounting medium for high resolution optical microscopy. Microscopy Research Technique. 70, 1-9.

2,2’-Thiodiethanol (TDE) mounting medium protocol (Harvard Center for Biological Imaging)

 

PROTOCOLOS

    • Mowiol/Dabco
      1. Mezclar 6 g. de glicerol con 2.4 g. de Mowiol (Calbiochem Ref.475904, Polysciences Ref.17951) en un tubo de centrifuga de 50 ml con una barra agitadora.
      2. Mientras se mezclan ir añadiendo 6 ml de agua MiliQ y dejar 2h a temperatura ambiente (RT).
      3. Añadir12 ml de Tris 0.2M , pH 8.5 y 230 μl de Thimerosal 1% (p/v en agua) (agente antibacteriano y antifúngico).
      4. Incubar en un baño a 50ºC durante 10' con agitación frecuente para disolver bien el Mowiol. Esta operación conviene repetirla hasta que el Mowiol quede bien disuelto.
      5. Centrifugar a 5000xg durante 15' para eliminar finos. Almacenar en alícuotas de 1 ml a –20ºC. Es estable durante un año.
      6. Para usarlo: calentar la alícuota descongelada a 37ºC durante 10' y añadir 2.5% DABCO (1,4-diazobicyclo-(2,2,2)-octane). Después de usarlo guardar a 4ºC. Puede durar así hasta un mes. Descartarlo cuando empiecen a aparecer depósitos cristalinos en las preparaciones.
    • Propyl Gallate

Mezcla: 2 g. de n-propyl gallate, 40 ml de glicerol, en 10 ml PBS 1X.

      1. Mezclar en un agitador calentando a 40-50ºC hasta que el n-propyl gallate esté completamente disuelto (alrrededor de 1h).
      2. Ajustar el pH a 7.6.
      3. Guardar a 4ºC protegido de la luz.
    • Phenylenediamine

Mezcla: 0.5 % p-phenylenediamine (Free Base) en 20mM Tris, pH 8.8, 90% glycerol.

      1. Disolverlo burbujeando nitrógeno durante 3-4h.
      2. Guardar a –20ºC.
      3. Hacer nuevo cuando adopte una coloración marrón oscura.
    • PVA-Dabco
      1. Añadir 4.8 g. de polyvinyl alcohol (PVA) a 12 g de glicerol mezclando muy bien.
      2. Añadir 12 ml de agua destilada y dejar agitando en una "noria" toda la noche a RT.
      3. Añadir 24 ml de 0.2M Tris-HCL a pH 8-8.5.
      4. Calentar en un baño a 50°C agitando durante 30'.
      5. Añadir 1.25 g de DABCO mezclándolo bien.
      6. Centrifugar a 10.000xg en minifuga durante 5'.
      7. Alicuotear el sobrenadante y guardar a -20°C.

Nota: El medio polimeriza en contacto con el aire sellando con fuerza el perímetro del cubre. Si se quisiera retirar bastará con mojarlo en buffer.

    • Medio de Murray

Preparación:

      1. Mezclar: 100 ml glycerol (que no tenga autofluorescencia), 5 g (n-propyl gallate), 0.25 g DABCO (1,4-diazobicyclo-(2,2,2)-octane), 0.0025 g PPD (para-phenylenediamine)
      2. Cubrir con papel de aluminio para proteger de la luz y dejar mezclando en un agitador toda la noche.
      3. Almacenar a 4ºC.

Uso:

    1. Lavar primero con PBS pH 8-8.5.
    2. Secar bien el PBS.
    3. Cubrir con la soución anterior durante 5'. Retirar entonces los restos de la solución.
    4. Hacer el montaje con esta solución.