Wednesday, 12th December 2018
    CULTIVOS + LAVADO Y ESTERILIZACIÓN
 

Responsable Servicio:
Mercedes Dávila

 

Cultivos + Lavado y Esterilización

 

Las actuaciones del Servicio se centran en:

  1. LAVADO y ESTERILIZACIÓN

    Material de uso general en los distintos laboratorios y servicios del CBMSO

    • El Servicio de Lavado de Material presta apoyo a los Grupos de Investigación, así como a otros Servicios del Centro que así lo requieren.
    • El personal del Servicio se encargan de la recogida, así como de la limpieza y esterilización del material de laboratorio y almacenamiento ordenado del mismo, dejándolo disponible para la recogida por parte de los usuarios.
    • También se encarga de la esterilización de todos los medios, bufferes,disoluciones etc. Tanto las que se preparan en el Servicio como las preparadas en los laboratorios y demandan su esterilización.
    • Ubicación: Planta 2, Laboratorio 210

    Material de uso en los laboratorios de cultivos P2

    • El personal del Servicio se encargan de la recogida del material de los laboratorios de cultivos y la desactivación de distintos residuos, así como de la limpieza y esterilización del material de laboratorio y almacenamiento ordenado del mismo, dejándolo disponible para la recogida por parte de los usuarios.
    • Verificación del funcionamiento de los autoclaves mediante controles periódicos (Test de Vacío, Test de Bowie & Dick, y Test Biológico).
  2. PREPARACIÓN DE MEDIOS Y DISOLUCIONES

    Laboratorio de Medios, en el que se preparan diferentes medios, soluciones tampón, etc., ofreciendo al usuario un stock permanente junto con la posibilidad de realizar encargos.

    Preparación de medios y disoluciones para células de origen animal.

    • Se ofrece un stock permanente de los siguientes medios y soluciones:
      • MEM 1X
      • RPMI
      • RPMI + hepes
      • PBS 1X
      • PBS 10X
      • PBS 1X compl.
      • BSS
      • DMEM 1X
      • DMEM 2X
      • TC-100
      • Antimicótico
      • Glutamina
      • EDTA
      • Gentamicina
      • M. antibióticos
      • AANE 100X
      • Tripsina EDTA
      • Piruvato sódico
      • Tripsina
      • Medios especiales</>
      • Agar1,4%
      • Agar 1%
      • Agar 1,4+ rojo neutro
      • M 3
      • A.C.D
      • DEAE-dextrano
      • tampón de lisis
      • HBSS
    • Estos medios y disoluciones se preparan en condiciones de máxima seguridad, siendo realizados en cabina de flujo laminar estéril y filtrados con membranas de 0.22 µm. Posteriormente se realiza un test de esterilidad.
    • Ubicación: Planta 2, Laboratorio 211 y Planta -1, Laboratorio 032

    Preparación de medios de cultivo para microorganismos.

    • Medios líquidos. Son preparados siguiendo los protocolos correspondientes según la demanda y esterilizados por calor en ciclo de líquidos 121ºC durante 20 minutos.
    • Medios sólidos. Son preparados con agar y esterilizados por calor en autoclave en ciclo de líquidos 121º C, 20 minutos.
    • Se ofrece un stock permanente de los siguientes medios y soluciones:
      • LB
      • LB+agar
      • Placas con medio LB+agar
      • Placas con medio LB+agar+antibiótico
      • medio 2x YT
    • Ubicación: Planta 1, Laboratorio 123

    Preparación de diversas disoluciones y tampones.

    • Se preparan siguiendo el protocolo correspondiente (apéndice Molecular Cloning, etc.) con controles sobre los pH y características físicas. Se esterilizan, en su mayoría, mediante autoclave de vapor o por filtración con membrana de 0.22 µm en cabina estéril.
    • Se ofrece un stock permanente de los siguientes medios y soluciones:
      • ECL (solución de revelado)
      • TBE 10X
      • TRIS GLICINA 10X
      • TBS 10X
      • PBS 10X
      • TAE 50X
      • Mg Cl2 1M
      • K Ac 5M
      • SSC 20X
      • TRIS 1,5M pH 8,8
      • TRIS 1M pH 6,8
      • TRIS 1M pH 7,5
      • TRIS 1M pH 8
      • TRIS 1M pH 8,8
      • SDS 10%
      • SDS 20%
      • EDTA 0,5 M pH 8
      • Na Cl 5M
      • Na Ac 3M pH 5,2
      • Fosfato Monosódico 1M
      • Fosfato Disódico 1M
      • RIPA
      • PB 0,2 N Ph:7,4
    • Ubicación: Planta 2, Laboratorio 211

    Tratamiento de sueros.

    • Filtrado por 0.22 μm, en cabina de flujo laminar estéril.
    • Test de esterilidad.

    Preparación de medio de sustento para la mosca Drosophila.

    • Se realiza con distintos componentes, utilizando como soporte sólido Agar. Posteriormente se esteriliza y dispensa en tubos, botellas, etc.
    • Ubicación: Planta 4, Laboratorio 413

    El servicio de preparación de Medios está asociado al servicio de Esterilización y cuenta con todo el equipamiento necesario (balanzas, pH metro, agitadores, neveras, etc.) para la preparación y almacenamiento de medios de cultivo (e.g., LB, LB-agar) y soluciones estériles (e.g., PBS, EDTA, TBE, TAE, Tris-HCl pH 7.4, etc.) que son de uso común y están a disposición de todos los grupos del Centro.

  3. GESTIÓN DE LOS LABORATORIOS DE CULTIVO

    El CBMSO dispone de 6 laboratorios de nivel de bioseguridad 2 para el uso de cultivos de células, con un total de 91 cabinas, distribuidos en las plantas 1, 2, 3, 4 y -1, con iguales características en las plantas de la 1 a la 4. En la 1ª planta se dispone de un laboratorio P2 para microbiología y en la planta -1 el laboratorio P2 se destina al trabajo con virus.

    Además en el CBMSO se dispone de un laboratorio P-3 que se utilizará exclusivamente para la realización de experimentos que impliquen cultivos de células humanas y/o animales, virus humanos y/o animales, y parásitos que requieran un nivel de bioseguridad 3.

    En estos laboratorios el personal del servicio se encarga de:

    • Gestión de compra de productos necesarios para la preparación de medios para el cultivo de células.
    • Gestión de compra de aparatos necesarios.
    • Preparación y esterilización de medios y disoluciones utilizadas para los diferentes trabajos en cultivos.
    • Control del buen funcionamiento y mantenimiento preventivo de los aparatos del Cuarto general de cultivos (incubadores, cabinas, pipeteadores, etc.).
    • Control de la limpieza general de los laboratorios.
    • Mantenimiento general de los laboratorios (limpieza de aparatos, retirada de residuos de plástico y vidrio, reposición de material).
    • Elaboración de protocolos de limpieza y mantenimiento.
    • Elaboración de normas de uso de la instalación.
    • Control de la facturación por usuario.
    • Detección de micoplasmas en los cultivos de los usuarios que pidan esta prestación.
  4. DETECCIÓN DE MICOPLASMAS

    La detección de micoplasmas se lleva a cabo en líneas celulares y medios de cultivo mediante un ensayo colorimétrico, basado en la capacidad de reconocer micoplasmas de "TOLL-LIKE-RECEPTOR 2" y a inducir la activación de NF-kB y otros factores de transcripción. En presencia de micoplasmas TLR2 expresa en la superficie de las células HEK-blue, activa estos factores transcripción que a su vez, inducen la secreción fosfatasa alcalina una proteína fácilmente detectable por la coloración azul del medio.

    El ensayo se realizara periódicamente informando con al menos 5 días de antelación, para que los usuarios recojan las muestras a testar y las dejen en el lugar señalizado para ello por el servicio.

    Para la eliminación de micoplasmas en los cultivos contaminados, el servicio ofrece alícuotas de antibióticos y el protocolo a seguir.

     

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