Servicios científicos
Microscopía electrónica
El servicio de Microscopía electrónica proporciona apoyo científico y técnico a los grupos de investigación, tanto internos como externos al CBM, interesados en utilizar la microscopía electrónica de transmisión para el análisis ultraestructural e inmunocitoquímico de muestras biológicas.
Podemos estudiar complejos macromoleculares, virus, bacterias, células eucariotas y tejidos. Los métodos disponibles incluyen técnicas convencionales de procesamiento a temperatura ambiente y criotécnicas como la criosustitución, la crioultramicrotomía y la criofractura.
Microscopios electrónicos de transmisión
– Microscopio electrónico de transmisión JEM1010 (Jeol,1992) Foto 1
– Pistola de emisión termoiónica: filamento de tungsteno.
– Tensión de aceleración hasta 100kV.
– Cámara digital bajo columna CMOS TemCam F416 (TVIPS)
– Microscopio electrónico de transmisión Flash JEM1400 (Jeol, 2017) Fot2
– Pistola de emisión termoiónica: Filamento LaB6.
– Tensión de aceleración de hasta 120kV.
– Cámara digital CMOS de lectura rápida OneView bajo columna (Gatan).
Microscopios electrónicos de transmisión
– Microscopio electrónico de transmisión JEM1010 (Jeol,1992) Foto 1
– Pistola de emisión termoiónica: filamento de tungsteno.
– Tensión de aceleración hasta 100kV.
– Cámara digital bajo columna CMOS TemCam F416 (TVIPS)
– Microscopio electrónico de transmisión Flash JEM1400 (Jeol, 2017) Fot2
– Pistola de emisión termoiónica: Filamento LaB6.
– Tensión de aceleración de hasta 120kV.
– Cámara digital CMOS de lectura rápida OneView bajo columna (Gatan).
Equipos de tratamiento de muestras en frío
- Criofijación por inmersión en líquido criogénico («plunge freezing» ), equipo KF80 (Reichert-Jung, Leica, 1992) Foto 3
– Vitrificación de muestras particuladas (macromoléculas, virus…) adsorbidas sobre rejillas en etano líquido.
– Criofijación de células o tejidos fijados químicamente y crioprotegidos para su procesamiento mediante criosustitución o criofracturación. - Criofijación de alta presión (HPF), LEICA EM ICE (2023). Foto 4
– Vitrificación de células, tejidos y pequeños organismos en condiciones nativas para su procesamiento mediante criosustitución o criofracturación. - Criosustitución automática, LEICA EM AFS2 (2023). Foto 5
– Deshidratación a bajas temperaturas, -90 °C, -80 °C, crioinclusión en resinas Lowicryl y polimerización con luz UV a bajas temperaturas. - Criofractura/grabado por congelación, equipo BAF060 (Leica, 2007) Foto 6
– Criofractura de células y tejidos y obtención de réplicas metálicas de la superficie fracturada.
– Pt/C sombreado rotatorio de ácidos nucleicos y virus.
Ultramicrotomos
– Ultramicrotomo ULTRACUT E (Reichert-Jung, Leica). Foto 7
– Obtención de cortes semifinos, 1µm, y ultrafinos, 50nm – 90nm a temperatura ambiente de muestras embebidas en resinas.
– Ultramicrotomo con criocámara, UCT (Leica). Foto 8
– Obtención de cortes semifinos, 1µm, y ultrafinos, 50nm – 90nm a temperatura ambiente de muestras incluidas en resinas.
– Obtención de criosecciones a baja temperatura, – 80 ºC a -120ºC para inmunomarcaje, técnica Tokuyasu.
Evaporador Leica EM AC600 (2023)
Foto 9
– Recubrimiento de las rejillas con carbón evaporado.
– Ionización de las rejillas mediante «Glow discharge».
Técnicas
– Tinción negativa de complejos macromoleculares y virus. Fototécnica 1
– Análisis de nanopartículas.
– Incrustación convencional de muestras biológicas en resinas y ultramicrotomía. Foto técnica 2
– Criofijación por inmersión en etano líquido y alta presión.
– Criosustitución e inclusión a baja temperatura. Foto técnica 3
– Inmunomicroscopía electrónica con conjugados de oro coloidal en secciones de resina. Foto técnica 4
– Inmunomicroscopía electrónica con conjugados de oro coloidal en criosecciones (técnica Tokuyasu). Foto técnica 5
– Criofractura, criosección y obtención de réplicas metálicas. Foto técnica 6
– Microscopía electrónica de ácidos nucleicos. Foto técnica 7
– Microscopía óptica-electrónica correlativa (CLEM).
Personal
Milagros Guerra Rodríguez
Lab.: 113 Ext.: 4532
mguerra(at)cbm.csic.es
Tania Matamoros Grande
Lab.: 113 Ext.: 4532
tmatamoros(at)cbm.csic.es
Martin Christoph Sachse
Lab.: 113 Ext.: 4538/4532
martin.sachse(at)cbm.csic.es