Los transgenes se insertan en posiciones aleatorias en el genoma. El plásmido debe contener las repeticiones invertidas del elemento P, así como el minigén blanco para identificar los positivos.

Requerimos 10 ug de ADN en un volumen de 10 ul para cada constructo inyectado. No es necesario que el usuario proporcione el ayudante de ADN.

Cepas disponibles en el servicio:

– w, yw

Inserción de transgenes en sitios receptores bien definidos del genoma, que contienen secuencias attP.

Los transgenes deben clonarse en vectores que contengan sitios attB y el gen miniblanco para identificar los positivos.

Las preparaciones de ADN deben ser de alta calidad y a una concentración mínima de 300 ng/ul en un volumen mínimo de 20 ul.

Cepas disponibles en el servicio:

–2L y[1] M{vas-int.Dm}ZH-2A w[*]; M{3xP3-RFP.attP’}ZH-22A B#24481

–2R y[1] M{vas-int.Dm}ZH-2A w[*]; M{3xP3-RFP.attP}ZH-51D B#24483

–3L y[1] M{vas-int.Dm}ZH-2A w[*]; M{3xP3-RFP.attP’}ZH-68E B#24485

–3R y[1] M{vas-int.Dm}ZH-2A w[*]; M{3xP3-RFP.attP}ZH-86Fb B#24749

Podemos inyectar mezclas de ácidos nucleicos que contienen gRNAs, plásmidos que codifican gRNAs y ssDNA o plantillas de plásmidos para la edición genómica asistida por CRISPR/Cas9. La cepa que utilizamos expresa Cas9 en la línea germinal bajo el control del promotor nanos.

El servicio no puede proporcionar apoyo técnico en relación con el diseño experimental o los diferentes enfoques técnicos posibles.

El usuario debe proporcionarnos la mezcla de ácido nucleico lista para la inyección. El servicio recomienda: 3 ug de ARN guía y 10 ug de donante en un volumen de 20ul.

Cepas disponibles en el servicio:

-25C y[1] v[1] P{y[+t7.7]=nos-phiC31\int.NLS}X;P{y[+t7.7]=CaryP}attP40 B#25709

-68A y[1] sc[1] v[1] P{y[+t7.7]=nos-phiC31\int.NLS}X; P{y[+t7.7]=CaryP}attP2 B#25710

–Noscas9: y[1] M{w[+mC]=nos-Cas9.P}ZH-2A w[*] B#54591

–Vascas9 RFP-:y[1]M{GFP[E .3xP3]=vas-Cas9.RFP-}ZH-2Aw[1118] B#55821

Cuando los usuarios necesiten inyectar muestras en cepas específicas de sus laboratorios, nuestras instalaciones cobrarán por la cría de estas cepas

PREPARACIÓN DE ADN

Recomendamos la purificación del ADN mediante el kit Qiagen o similar. La concentración y pureza del ADN deben analizarse antes del envío.

HORARIO

Para la generación de transgenes mediada por elementos P o por la integrasa PhiC31, inyectamos de 300 a 400 embriones por plásmido. En el caso del método CRISPR/Cas9, inyectamos de 500 a 600 embriones por plásmido.

Las larvas supervivientes (de 75 a 150) se envían al usuario 3-4 días después de la inyección.

Los usuarios serán responsables de buscar líneas transgénicas en sus laboratorios. Si no se obtiene ningún transformante, repetiremos la inyección una vez, con prioridad y sin coste adicional.

ENVÍOS

El envío de larvas tras la inyección corre a cargo del usuario. Hay varios transportistas disponibles.

INSTRUCCIONES DE ENVÍO DE MUESTRAS

Las muestras deben enviarse a la siguiente dirección:

Mar Casado/Nuria Esteban
Centro de Biología Molecular Severo Ochoa
C/Nicolás Cabrera 1
28049, Madrid
Teléfono: +34-911964610

El servicio requiere que los usuarios rellenen los siguientes formularios. Si es la primera vez que utiliza nuestro servicio, deberá firmar también el acuerdo legal.

DOCUMENTOS

• Acuerdo
• Condiciones generales
• Formulario de pedido
• Información de facturación